Se basa en que el metabolismo oxidativo sólo produce ácido en condiciones de aerobiosis, mientras que el fermentativo lo genera en condiciones de anaerobiosis.
Además en el metabolismo fermentativo, a veces se forma gas.
La formación de ácido se detecta por el viraje de un indicador de pH, mientras que la de gas por la aparición de burbujas dispersas, grietas, o bien porque el medio se despega del fondo del tubo.
La prueba se puede realizar sobre distintos hidratos de carbono, los más utilizados son: glucosa, lactosa, sacarosa y maltosa.

Imagen obtenida de Dr. SaumyaSingh10/biochemical-reactions